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安捷倫色譜柱緩沖鹽正確的使用方式

瀏覽次數:1064發布日期:2018-05-28
  緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展,使安捷倫色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長安捷倫色譜柱使用壽命非常重要。
  正確使用安捷倫色譜柱緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
  1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗安捷倫色譜柱過夜。
  2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗安捷倫色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
  注意:過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,區別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
  3、緩沖鹽析出的補救方法:
  1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗安捷倫色譜柱120min
  2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗安捷倫色譜柱過夜。強保留物質和大分子化合物在安捷倫色譜柱中累積,對樣品中的化合物產生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應,需要一定的時間才會體現出來,但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質,因此要防止強保留物質的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗安捷倫色譜柱。
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