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如何做標準方法的驗證?

瀏覽次數:308發布日期:2021-08-09

如何做標準方法的驗證?

圣賓儀器科技上海有限公司

方法驗證是指實驗室通過核查,提供客觀有效證據證明自身滿足檢測方法規定要求的過程,即證實該方法能在該實驗室現有的設施設備、人員、環境等條件下獲得令人滿意的結果,適用于實驗室新引入的標準方法。

方法驗證過程中關鍵的參數取決于方法的特性和可能測到的樣品基質的檢測范圍,至少應測定準確度和精密度。對于痕量化學分析實驗室,實驗室還應確保獲得適當的檢出限(LOD)和定量限(LQD)。通常情況下定量分析方法驗證的參數包括但不限于檢出限、定量限、選擇性、線性范圍、精密度(重復性和再現性)、準確度。

一、檢出限

用特定分析方法在給定的置信度內可從樣品中定性檢出待測物質的zui低濃度或最小量即為方法的檢出限。方法檢出限的計算和表達方法有很多,常見的包括空白標準偏差法、信噪比法、逐步稀釋法等。同一個檢測指標不同的檢出限表達結果差異可能會達到幾個數量級。實驗室在選擇檢出限的表示方法時,應盡可能的研究多種表示方法,對比結果,選擇最佳的方法來表示該方法的檢出限。如果檢測方法中已給方法檢出限,則在給出的方法檢出限濃度水平上,通過分析該濃度水平的樣品,用以驗證給出方法檢出限,分析結果應在給出的方法檢出限±20%范圍內;若方法未給出檢出限,實驗室則應選擇一個適當的方法研究及計算表示。下面詳細闡述各種方法檢出限的計算表達方式。

1、空白標準偏差法(適用于光譜法檢測)

按照樣品分析的全部步驟,重復nn≥7)次空白試驗,將多次測定結果換算為樣品中的濃度或含量,計算n次平行測定的標準偏差,按公式計算方法檢出限。

MDL= t (n 1,0.99)×S

MDL——方法檢出限;

n——樣品平行測定的次數;

t——自由度為n-1,置信度為99%時的t分布(單側);

S——n次平行測定的標準偏差

其中,當自由度為n -1,置信度為99% 時的t 值可參考表取值


平行測定次數(n)

自由度(n-1)

t (n 1,0.99)

7

6

3.143

8

7

2.998

10

9

2.821

11

10

2.764

16

15

2.602

21

20

2.528


2、信噪比法(適用于色譜法檢測)

對空白樣品加入一定濃度(一般為估計的方法檢出限)的標準物質,按照樣品分析的全部步驟進行試驗,計算儀器上待測物與噪聲的信號比值,若信噪比S/N3時,則進一步減少加標濃度,反之則增加加標濃度重新進行試驗。當信噪比S/N3時,則對應的樣品濃度為該方法的檢出限,按公式計算方法檢出限。

MDL=S/b

S——儀器噪音的3倍,即儀器能辨認的最小的物質信號;

b——校準曲線回歸方程中的斜率;

3、最小液滴體積法(適用于滴定法檢測)

一般根據所用的滴定管產生的最小液滴的體積來計算,按公式計算方法檢出限。

MDL= kλρV0M1/ M0V1

λ——被測組分與滴定液的摩爾比;

ρ——滴定液的質量濃度,g/ml

V0——滴定管所產生的最小液滴體積,ml

M0——滴定液的摩爾質量,g/mol

V1——被測組分的取樣體積,ml

M1——被測項目的摩爾質量,g/mol

k——當為一次滴定時,k1;當為反滴定或間接滴定時,k2

二、定量限

在限定誤差能滿足預定要求的前提下,用特定方法能夠準確定量測定待測物質的zui低濃度或最小量即為方法的定量限。一般取3~4倍的方法檢出限作為方法的定量限。

三、選擇性

選擇性是指用某種分析方法測定某組分時,能夠避免樣品中其他共存組分干擾的能力。如果方法已提供了干擾情況的所有信息,則實驗室無需對干擾情況采取進一步的研究。如果方法未提供干擾情況的信息或信息不完整,則須對可能存在的干擾情況進行研究。

對于化學分析方法,在有干擾的情況下,如:基質成分、代謝物、降解產物、內源性物質等,保證檢測結果的準確性至關重要,實驗室可使用但不限于下述兩種方法檢查干擾:

方法1:分析一定數量的代表性空白樣品,檢查在目標分析物出現的區域是否有干擾(信號、峰等);

方法2:在代表性空白樣品中添加一定濃度的有可能干擾分析物定性和/或定量的物質。

四、線性范圍

對于分析方法而言,用線性計算模型來定義儀器響應與濃度的關系,該計算模型的應用范圍即為線性范圍。在對標準方法進行線性及校準驗證時,應按標準文件規定的各個濃度點配制校準曲線,以驗證儀器的測定上限及下限是否能滿足標準文件所規定的線性范圍,以及由此得到的相關系數r是否滿足標準要求。

五、精密度

在規定條件下,多次獨立測試結果間的一致程度即為精密度。精密度包括重復性和再現性,一般采取有證標準物質/標準樣品進行測定。實驗室zhi定某一名檢測人員對高、中、低三種不同含量水平(高、中、低三種含量水平建議依次為10倍定量限、2倍定量限、定量限)的同一樣品,按樣品處理程序每個樣品平行測定6次,分別計算不同濃度或含量樣品的平均值、標準偏差、相對標準偏差等各項參數,計算結果應小于或等于標準規定的重復性限r

六、準確度

檢測結果與樣品真值間的一致程度即為準確度,一般采用測定有證標準樣品或加標回收試驗進行評估驗證。若實驗室使用有證標準樣品進行準確度驗證,則需對對3個不同含量水平(含量水平的選擇見五、精密度")的有證標準物質/標準樣品進行測定,每個有證標準物質/標準樣品按全程序平行測定6 次,分別計算不同濃度或含量水平有證標準物質/標準樣品的平均值、標準偏差、相對誤差等各項參數。若實驗室對實際樣品進行加標試驗進行準確度驗證,則需對每個樣品類型的不同含量水平的統一樣品中分別加入一定量的有證標準物質/標準樣品進行測定,每個加標樣品按全程序平行測定6次,分別計算每個統一樣品的加標回收率。

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